% 99 Saflık Hplc Oligonükleotitler 150nt Uzunluk Sayfa Rpc Saflaştırma

Giriş

Son teknoloji ürünü oligo-sentezleyici ile CELLFREE tarafından üretilen oligonükleotidler, düşük kesik sekanslarla önemli ölçüde saflığa sahiptir.Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR), DNA dizilimi ve gen sentezini içeren uygulamalar için başka saflaştırma yoktur.Bununla birlikte, oligonükleotitler her zaman eksik sentez ve koruma kaldırma ürünü, yanlış sentezlenmiş oligonükleotit ürünleri ve sentezden sonra bazlardan ayrılan koruyucu gruplarla kontamine olur.Saflaştırmanın gerekip gerekmediği kararı, istenen tam uzunluktaki ürünün (n-mer) bu istenmeyen yan ürünlerle muhtemel kirlenme derecesinin ve bu kirleticilerin amaçlanan deney üzerindeki olası etkilerinin değerlendirilmesine bağlıdır.

fonksiyon

1. Tam uzunluktaki n-merlerin eksik ürünlerden ayrılması (n-1 mer, n-2 mer, et al).

2. Eksik korumanın kaldırılması, yoksun bırakma, dimerizasyon, dallanma, ve ark.

3. Bölünmüş bloklama gruplarının bazlardan uzaklaştırılması.

Arıtma Seçenekleri

Oligonükleotitlerin saflaştırılması çeşitli yöntemlerle gerçekleştirilebilir, Seçilen saflaştırma yöntemi, oligonükleotidin boyutuna, uygulama ile gerekli olan saflık derecesine bağlıdır.Sık kullanılan ve kullanılan yaygın teknikler, poliakrilamid jel saflaştırma (PAGE), iyon değiştirme (IE) veya ters faz (RP) HPLC ve RPC gibi ters faz kartuşlarıdır.Ters faz kartuşu (RPC):

Bu, HPLC ters faz saflaştırmasına ucuz bir alternatiftir.

Poliakrilamid Jel Elektroforezi (PAGE):

PAGE, bir jel matrisi boyunca bir elektrik yükü geçirerek oligonükleotidleri kütle / yük oranları temelinde ayırır.Negatif yüklü oligonükleotitler, matris yoluyla çekilir.Yaygın bir tespit yöntemi, floresan bir arka plan üzerinde bulunan jel üzerinde bir UV lambasının tutulduğu UV arka gölgelemesidir.Oligonükleotidler UV ışığını emerek arka plan üzerinde bir gölge bırakır.Denatüre edici PAGE (jel, analiz sırasında herhangi bir çift şeridi tek iplikçiklere ayırmaya zorlamak için yüksek üre içeriğine sahiptir), 15 mer uzunluktan daha uzun oligonükleotid için kullanılabilir.

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisi (HPLC):

HPLC iyi bir alternatif saflaştırma stratejisidir.Oligonükleotid kimyasında en yaygın olarak kullanılan ikisi, kütle / lipofiliklik oranı temelinde ayrılan ters faz (RP) ve anyonik kütle / yük oranı temelinde ayrılan anyon değişimidir (AX).IE-HPLC, tam uzunlukta ve n-1 mer oligonükleotitlerin 60 tortu uzunluğuna kadar çözünürlüğü için RP-HPLC'den önemli ölçüde daha verimlidir.Ayrıca, bu HPLC stratejilerinin her ikisi de, hem yarılmış hidrofobik koruma gruplarını hem de modifiye edilmiş veya tam olarak korumasız hale getirilmiş oligonükleotitleri nihai üründen verimli bir şekilde uzaklaştırır.Hem RP- hem de IE-HPLC, küçük ila orta boy oligonükleotitler için nispeten yüksek kapasiteli, düşük maliyetli saflaştırma stratejileridir.

Ters Faz HPLC:

Bu yöntem ayrıca 5 'tritil koruma grubunu kolona bağlanma aracı olarak kullanır.Bu yöntem 55 baza kadar ve genellikle% 90 ila 95 saflıktaki oligolar için iyi çalışır.

Hizmet özellikleri