Hedef gen Dizisi Spesifik Nükleazlar Bitki Genomu Düzenleme

Giriş

Olumsuz geni silmek ve hedef karakterleri doğru bir şekilde geliştirmek için gen düzenleme tekniğini kullanarak mahsul odaklı genetik programlamanın verimliliğini artırmak faydalıdır.Kullanışlı, doğru ve çok hedefli gen düzenleme fonksiyonundan yararlanan CRISPR-Cas9, böcek zararlılarına ve kuraklığa karşı fenotipik özellikleri iyileştirmek için bitki genlerine başarıyla uygulanmıştır.Bitkilerin hassas genetik gelişiminde yaygın olarak kullanılması beklenmektedir.Hassas bitki geninin düzenlenmesi, 2016'da on büyük bilimsel ve teknolojik atılımdan biri olarak listelenmiştir. CRISPR-Cas9'a dayanan hedefli gen mühendisliği, geleneksel bitki yetiştiriciliğinin ve genetik olarak değiştirilmiş organizma (GDO) yöntemlerinin yerini, sürdürülebilirliği sağlamak için ürün özelliklerini iyileştirmek için yavaş yavaş değiştirmiştir. ekin üretimi.

Genom düzenlemesini sağlayan sekansa özgü nükleazların ortaya çıkması, temel ve uygulamalı biyolojide devrim yaratıyor.CRISPR-Cas9'un piyasaya sürülmesinden bu yana, genom düzenleme, esas olarak CRISPR-Cas9 tarafından üretilen çift sarmallı kopuklukların homolog olmayan uç birleştirme yoluyla mutasyonları indükleyerek, gen fonksiyonunu karakterize etmek ve özellikleri iyileştirmek için dönüştürülebilir bitkilerde yaygın olarak kullanılmaktadır.Bununla birlikte, bitkilerde hassas gen düzenlemesinin gerçekleştirilmesi oldukça arzu edilir olacaktır.

Akış şeması

1. SgRNA tasarım ve yapımı

Genel olarak, sgRNA, U3 veya U6 küçük nükleer RNA gen promotörleri tarafından tahrik edilir.Tesiste birden fazla genom hedefi gerektiğinde, tek bir ikili vektöre birkaç sgRNA kaseti yerleştirilmesi önerilir.

2. Cas9 ve sgRNA'nın bitki hücrelerine verilmesi

Agrobacterium aracılı transformasyon, Cas9 / sgRNA ekspresyon kasetlerini bitki hücrelerine sokmanın en yaygın yoludur.İstek halinde diğer yöntemler de kullanılabilir.

3. Hedeflenen mutasyonların analizi

Endonükleazlar (örn. T7E1 enzimi)

Sanger Sıralaması

4. Teslimat

Avantajları

• CELLFREE sgRNA tasarımı, Cas9 kodon optimizasyonu, sgRNA ve Cas9 sentezi ve etkinlik tespiti için eksiksiz çözümler sunar.
• CELLFREE, birden fazla tür için verimli ve doğru tasarımlar sağlar.
• CELLFREE Cas9 proteinini, bitki hücrelerinde verimli bir şekilde çevrilmesini sağlamak için optimize edin.